基因检测样品的保存条件(生物检测样品的准备、包装、保存和运输指南)

基因检测样品的保存条件：生物检测样品的准备、包装、保存和运输指南

1样本准备应遵循的基本原则1.1代表性原则取样的代表性与实验结果是否具有科学意义有关，因此您应根据实验目的仔细选择您的取样方案。病变组织样本不得包含正常组织，病变组织不得包含在正常组织样本中。如果条件允许，试验组和控制组的样本应在材料的时间、位置和处理条件上尽可能一致，否则可能会影响试验结果的可信度。1.2准确性原则必须准确记录代表性样本的各种特征数据，并按要求（低温、快速）采集、制备、储存和运输，最终按实验设计正确进行实验和数据处理。1.3快速原则样品质量是影响实验结果的最关键因素。因此，样品在采集、制备、储存和运输过程中应尽可能快速地缩短从样品采集到实验的时间。1.4低温原则取样离体后，应尽快放置在液氮、干冰或-80℃冰箱中，并确保实验前始终处于实验状态-70℃以下是为了避免DNA/RNA降解。2样本准备方法2.1贴壁细胞2.1.1RNA2.1.1.1壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；2.1.1.2加入适量的PBS冲洗缓冲液一次，彻底去除PBS缓冲液2.1.1.3按每10cm2(相当于六孔板一个孔或一个孔或六孔板35mm细胞加入直径培养皿)1mLTRIzol加入试剂比例TRIzol试剂；2.1.1.4使用玻璃滴管(或移液器)Tip头)反复吹细胞，直到看不到细胞块，使其完全溶解TRIzol形成清澈不粘稠的液体；2.1.1.5将TRIzol液体全部转移RNase-free的试管中2.1.1.6放入-80℃保存在冰箱里。2.1.2miRNA2.1.2.1壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；2.1.2.2加入适量的PBS冲洗缓冲液一次，彻底去除PBS缓冲液；2.1.2.3按每105-107的细胞加入600μlLysis/BindingSolution(我公司可免费提供)；2.1.2.4使用移液器Tip头反复吹细胞，直到看不到细胞块，使其完全溶解在裂解液中，形成明亮不粘稠的液体；2.1.2.5将液体全部转移到RNase-free的试管中；2.1.2.6放入-80℃保存在冰箱里。2.1.3DNA2.1.3.1消化和收集胰酶1-4×106细胞（60mm培养皿或T25培养瓶)，转移到1.5ml离心管中；2.1.3.23000rpm离心5min，去胰酶；2.1.3.3PBS轻轻吹一次清洗。3000rpm离心5min，去上清；2.1.3.4放入-80℃保存在冰箱里。2.1.4蛋白2.1.4.1壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；2.1.4.2加入适量的PBS冲洗缓冲液一次，彻底去除PBS缓冲液2.1.4.3按六孔板一孔或35mm加入直径培养皿细胞200µLTRIzol试剂的比例加入RIPA试剂；2.1.4.4使用玻璃滴管(或移液器)Tip头)反复吹细胞，直到看不到细胞块，使其完全溶解RIPA形成清澈不粘稠的液体；2.1.4.5将所有液体转移到离心管；2.1.4.6放入-80℃保存在冰箱里。2.2悬浮细胞2.2.1RNA2.2.1.1悬浮细胞培养诱导后，去除培养液；2.2.1.2使用保留的细胞PBS快速清洗缓冲液一次，去除离心PBS缓冲液；2.2.1.3按照每5×106个细胞加1mLTRIzol的比例加入TRIzol使用玻璃滴管(或移液器)试剂Tip头)反复吹细胞，直到看不到细胞块，使其完全溶解TRIzol形成清澈不粘稠的液体；2.2.1.4放入-80℃保存在冰箱里。2.2.2miRNA2.2.2.1悬浮细胞培养诱导后，去除培养液；2.2.2.2使用保留的细胞PBS快速清洗缓冲液一次，去除离心PBS缓冲液；2.2.2.3按照每105-107的细胞加入600μlLysis/BindingSolution(我公司可免费提供)；2.2.2.4使用移液器Tip头反复吹打细胞，直至看不见成团的细胞块，使之充分溶解于裂解液形成清澈不粘稠的液体；2.2.2.5将液体全部转移到RNase-free的试管中；2.2.2.6放入-80℃保存在冰箱里。2.2.3DNA2.2.3.1收集约1-4×106细胞（60mm培养皿或T25培养瓶），转移到1.5ml离心管中；2.2.3.23000rpm离心5min；2.2.3.3PBS轻轻吹一次清洗。3000rpm离心5min，去上清；2.2.3.4放入-80℃保存在冰箱里。2.2.4蛋白2.2.4.1壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；2.2.4.2加入适量的PBS冲洗缓冲液一次，彻底去除PBS缓冲液2.2.4.3按六孔板一孔或35mm加入直径培养皿细胞200µLTRIzol加入试剂比例RIPA试剂；2.2.4.4使用玻璃滴管(或移液器)Tip头)反复吹细胞，直到看不到细胞块，使其完全溶解RIPA形成清澈不粘稠的液体；2.2.4.5将所有液体转移到离心管；2.2.4.6放入-80℃保存在冰箱里。2.3全血2.3.1RNA2.3.1.1抽提RNA建议采用BD的PAXgene管提取全血。使用淋巴细胞分离液或红细胞裂解液会使活细胞处于压力状态，从而影响细胞的基因表达；2.3.1.2PAXgene管提取全血；2.3.1.3采血以后，颠倒混匀8-10次；2.3.1.44℃过夜后转入-20℃或-80℃保存在冰箱里。2.3.2DNA2.3.2.1用EDTA抗凝管抽取1-2ml全血；2.3.2.2颠倒混合抗凝管8-10二、充分混合EDTA全血，保证抗凝效果；2.3.2.3放入-20℃保存在冰箱里。2.4血浆2.4.1采集外周血2mL，迅速转入EDTA在抗凝管中，涡旋或使用移液器Tip混匀；2.4.21小时(室温)或2小时(4℃以下操作应在条件下进行：基因检测样本保存条件

4℃，820g（9,400rpm）离心10分钟；2.4.3吸约1mL上清转清洁1.5mL离心管，16，000g(13,200rpm),4℃,离心10分钟，小心吸收新的离心管；2.4.4放入-80℃保存在冰箱里。2.5血清2.5.1采集外周血2mL，涡旋或移液器迅速转入促凝管Tip混匀；2.5.2放入冰箱4℃条件下凝固4h，4℃，3000rpm离心10分钟；2.5.3把上面清理干净1.5mL离心管，16，000g(13,200rpm),4℃,离心10分钟，小心吸收新的离心管；2.5.4放入-80℃保存在冰箱里。2.6动物组织2.6.1RNA，miRNA、DNA、蛋白质及病例检测2.6.1.1首先准备好包装样品的冷冻保存管，用油性记号笔在冷冻保存管表面多处注明样品编号；2.6.1.2动物取料时：基因检测样品的保存条件

病理样本：基因检测样本的保存条件

10%福尔马林全身灌流，冲出待检测样本中的血液；电镜样本：用生理盐水全身灌流，冲出待检测样本中的血液；RNA，miRNA、DNA、蛋白质检测样本:用生理盐水灌注全身，冲出待检测样本中的血液；准确切除所需组织后，立即切除结缔组织、脂肪组织等非研究性组织。确保组织分成小块；2.6.1.3在生理盐水或PBS快速漂洗样品，去除血渍和污垢；2.6.1.4用镊子夹住样本，放入液氮中冷却样本（病理检测的组织需置入4%多聚甲醛固定，电镜样本置于2.5%的戊二醛4℃固定）；2.6.1.5根据实验目的的不同条件，放入准备好的储存管中；2.6.1.6填写样品登记表，注明样品名称、组织类型、编号、取样日期、样品处理过程等。2.7临床组织标本2.7.1RNA，miRNA、DNA、蛋白质和病理检测2.7.1.1首先准备好包装样品的冷冻保存管，用油性记号笔在冷冻保存管表面多处注明样品编号；2.7.1.2准确切除所需组织后，立即切除非研究所需的组织，并将组织分成小块；2.7.1.3用镊子夹住样品，放入液氮中冷却样品(4%以上的聚甲醛固定在病理检测组织中，电镜样品固定在2.5%的戊二醛4℃固定）；2.7.1.4根据实验目的的不同条件，放入准备好的储存管中；2.7.1.5填写样品登记表，注明样品名称、组织类型、编号、取样日期、样品处理过程等。3样本包装3.1注意事项3.1.1包装样品的铝箔或冷冻储存管表面，样品编号和样品类型用油性记号笔标明。不要接触乙醇等有机溶剂。3.1.2样品不应直接用纱布、纸张和一次性手套包裹，而应用铝箔或冷冻储存管包裹，然后放入样品袋中。3.1.3液氮中不要用玻璃容器保存样品；样品包装中不要使用透明胶带。3.1.4不要将标签纸或其易碎，所以不要将标签纸或其它纸制的说明文件放入样品袋中。3.1.5样品袋绳上应贴上标签纸，不得贴在容器表面，以免脱落造成样品混乱。3.1.6不要在样品袋中放置太多样品，以防止液氮罐或从液氮罐中取出。样品袋在使用前预冷液氮。3.1.7客户在填写样本登记表时，应详细描述样本的类型、处理方法、存储条件和存储时间，以便技术人员能够确定合理的实验计划。4样本存储4.1样品冷冻储存4.1.1采集组织样品后，样品迅速放入进口优质冷冻管中，拧紧后立即放入液氮。然后转移到-80℃中保存。4.1.2组织样本储存在液氮或液氮中-80℃冰箱里。液氮保存样品，注意不要用Eppendorf管道和国产冷冻管道，由于这些管道从液氮中取出时容易爆裂，造成样品损失。4.1.3细胞样本经Trizol或RIPA处理后储存-80℃冰箱中。在-20℃冰箱不宜存放太久。4.1.4建议使用血样PAXgene管（BD）保存。4.1.5RNA样本储存于-80℃冰箱中。4.1.6病理检测样本包裹的蜡块常温保存；冷冻样本固定在4%以上的聚甲醛中24h，蔗糖梯度脱水(15%，30%)，4℃保存运输，最后OCT包埋；电镜样本米粒大1cm3待检测样本2.5戊二醛固定%，4℃避光保存。5样本运输5.1干冰运输5.1.1飞机运输干冰的上限约为2kg，原则上不能运输超过2kg。火车运输不受限制。5.1.2干冰运输应采用壁厚、质量好的泡沫箱，材料应存放在编号的冷冻储存管中，用塑料袋包装后埋在干冰中。泡沫箱应扣紧，并用密封带密封。外套纸箱包装，避免开裂。并注明轻轻放置提示，以确保安全运输。5.1.3当地快递公司可以委托干冰运输，注意一定要确保48小时送达我方手中，不能送货上门的应提前通知我方。5.1.424小时到达时，干冰量不得小于5公斤；48小时到达时，干冰量不得小于8公斤。夏天可以适当增加一些干冰(通常1.5倍)。如果到达时间超过48小时，建议不要用这种方法运输。5.1.5在干冰上再放一排液体冰袋。5.1.6委托快递运输时，应随时跟踪货物情况，记录货单号，并与快递公司保持联系。5.2冰袋（GelIceorIcePack）5.2.1如果样品能在24小时内到达公司，以下样品可以用冰袋运输。5.2.2保存于RNAlater组织样本。5.2.3保存于TRIzol细胞样本或均匀浆组织样本。5.2.4用于抽提DNA新鲜抗凝全血样本。6注意事项6.1为了保证实验的顺利进行，我们强烈建议您在取样时同时备份2~3份，如备3份，则送给我们两份，如果备份2份，则送样一份，你自己留一份，以防止一些样本降解，重新取材或送样耽误你的时间。即使所有样本都合格，您也可以用备份样本进行其他实验（如定量验证、蛋白质、生化等）。6.2备份有两种，一种是严格备份，即样本取下后分为两种，这两种样本基本具有相同的性质。另一种是非严格备份，即生物重复样本，其同质性差于前者。